斯。滞留数月后,又于翌年到达曼图亚，为当地的伯爵夫人，一位酷嗜文艺并广泛收罗艺术珍品的鉴赏家画了几幅肖像，其中有一张素描颇象他后来那一幅《蒙娜丽莎》的侧面像。
1500年4月,达芬奇再次回到故乡佛罗伦萨。得知兰则塔大教堂的主祭坛需要一幅祭坛画，他表示愿意完成此任务。僧侣们兴奋地把达?芬奇的全家请进了教堂，予以十分殷勤的款待，但达芬奇久久没有动笔。
最后，他向市民展出的一幅经过精心构思的《圣母子与圣安娜圣约翰》素描草图，立即引起轰动，其构图原理和画法对艺术界有极大影响，米开朗基罗和拉斐尔等人也从中得到启发。
这幅素描是以寻求人物的明暗调子为准绳来描绘的。达芬奇把圣安娜马利亚基督和施洗约翰四人，作为一个融洽欢聚的家庭成员加以集中表现。群像中以圣安娜与圣母的对话形式为主题，表达了一种人间家庭的天伦之情。由于人物感情细腻，相互交叠的身躯也给人以亲密无间的美好气氛。
1506年，达芬奇回到米兰以后的两年，他又画了同名的一幅油画《圣母子与圣安娜》。这幅画在板上的油画与当年那幅素描虽属于同一构思，但比较起来显然不如素描来得亲切和诗意盎然些。